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原代細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用和分離時(shí)需要注意的方面

更新時(shí)間:2021-03-12 點(diǎn)擊量:1667
   原代細(xì)胞來(lái)源于活體或是新近死亡的供體,通過(guò)機(jī)械或酶方法解離獲得,其方案根據(jù)來(lái)源物種(例如人,小鼠)和所涉及的組織類(lèi)型而變化。通常包含以下步驟:組織切割和切碎,酶解,反復(fù)洗滌,研磨和微濾分餾,后重新懸浮和接種收集的細(xì)胞群。對(duì)于松散的、被纖維結(jié)締包圍的組織,機(jī)械均質(zhì)化可能足以進(jìn)行解離。如果您的組織來(lái)源是外周血,差速離心便可以分離目的細(xì)胞。
  原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用:
  1、為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段;
  2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;
  3、服務(wù)于臨床實(shí)踐,用于藥物篩選等。
  原代細(xì)胞培養(yǎng)之后分離需要注意的地方:
  1、原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí),它們之間會(huì)互相影響,在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)的活性物質(zhì),使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(zhǎng)。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)低,細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小,也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨(dú)立生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)大,會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。
  2、適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度,給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類(lèi)似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用,會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。
  3、盡快使接種的細(xì)胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵??梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h,待細(xì)胞貼壁后,再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
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